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2，鞋子里料是指哪里

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3，什么是侧翼引物

侧翼~flanking~指的就是目的基因附近的序列~侧翼引物应该就是和侧翼序列匹配的引物吧~

你可以是试试，takara的la试剂盒！这个我们实验室就是用的这么，tail-pcr 不太好用！我觉得！虽然tall-pcr有着上述众多的优点，但是它仍然存在着不尽人意的地方： tail-pcr反应需要较多的引物组合。此外，由于ap引物存在有限的结合位点，对于个别的侧翼序列，即使使用不同的简并引物也难以扩增到阳性结果。整个tail-pcr需要一系列连续的反应，反应条件的设置要求比较精细[51]。1.5.3 利用接头的染色体步移技术此技术是一个用来扩增基因组中已知序列两侧未知序列的方法。其原理如下：首先，用几种限制性内切酶酶切基因组dna，然后将酶切后的dna与体外合成的接头在适当的条件下连接，取适量连接产物直接作为pcr模板进行pcr反应，其中一条引物为接头特异引物，其序列能与接头序列互补，另一条引物为基因特异引物，其序列与已知序列互补。最后将得到的pcr产物测序[53]。根据这个原理，takara公司推出了la pcrtm in vitro cloning试剂盒(ddr015)来克隆基因侧翼未知序列，其流程如图1-4。因为在设计上，cassette的5′末端没有磷酸基，所以target dna的3′末端和cassette的5′末端的连接部位形成缺口。在第一次pcr反应的第一个循环时，从primer c1开始的延伸反应在连接部位终止，限制了primer c1和primer c1同一引物之间的扩增，从而控制了非特异性pcr扩增。只有从primer s1开始延伸合成的dna链，才能成为primer c1的模板，进行dna的特异性扩增反应。再用内侧primer (primer c2，primer s2) 进行第二次pcr反应，可以高效特异性地扩增目的dna[54]。

什么是侧翼引物